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Evaluation de biomarcadores para el diagnóstico de endometriosis

Evaluation de biomarcadores para el diagnóstico de endometriosis

Fertility and Sterility
Volume 95, Issue 4, 15 March 2011, Pages 1338-1343.e3

Objetivo

Para probar la hipótesis de que las proteínas y péptidos específicos se expresan diferencialmente en el endometrio eutópico de las mujeres con y sin enodmetyriosis y en determinadas fases de la enfermedad (mínima, leve, moderada o severa) durante la fase secretora.

Diseño

Los pacientes con endometriosis se compararon con los controles.

Marco

hospital de la Universidad.
Paciente (s)

Un total de 29 pacientes durante la fase secretora fueron seleccionados para este estudio sobre la base de la fase del ciclo y la presencia o ausencia de endometriosis
Intervención (s)

LA endometriosis fue confirmado por laparoscopia e histológicamente en 19 pacientes con la revisión de la Sociedad Americana de Medicina Reproductiva etapas (9 mínima y leve moderada grave y 10), y la presencia de una pelvis normal fue documentada por laparoscopia en 10 controles.

Principales medidas de resultado (s)

Expresión de proteínas del endometrio fue evaluado con el uso de desorción láser de superficie mejorada / espectrometría de masas de ionización de tiempo de vuelo. La expresión diferencial de los picos de masa de la proteína se analizó con el uso de algoritmos máquina de vectores soporte y los modelos de regresión logística.

Conclusión (s)

desorción láser de superficie mejorada / ionización total del tiempo de vuelo análisis de espectrometría de fase secretora del endometrio en combinación con la bioinformática presenta un panel de prospectiva de posibles biomarcadores con una sensibilidad del 100% y una especificidad del 100% para el diagnóstico de endometrisis minima y leve.

Palabras clave: endometrio, la proteómica; SELDI-TOF-MS; fase secretora; termendometriosisnext legislatura anterior; máquinas de vectores soporte

Edad del hombre y reproducción asistida

Efecto de la edad del hombre en los resultados de las técnicas de reproducción asistida.

La edad paterna no se sabe muy bien el efecto que puede tener sobre el embarazo pero sí se ha observado que está relacionada con una disminución en el volumen de eyaculado, menor movilidad espermática y mayor número de espermatozoides con morfología anormal.

La edad materna y la paterna están relacionadas por lo que los aportes de ambos gametos son difíciles de separar. Entre los pocos estudios previos que han evaluado la edad paterna utilizando el modelo de donación de óvulos, los resultados son contradictorios. Para este estudio, se ha tratado de evaluar las aportaciones independientes de cada miembro de la pareja en los resultados o tasas de embarazo en ciclos de donación de óvulos.

En este estudio, no se observa una asociación estadísticamente significativa entre la probabilidad de nacidos vivos y los ciclos de los donantes. Cuando el número de ciclo de tratamiento y la edad de la mujer receptora se han tenido en cuenta, la edad masculina no tenía asociación significativa con los resultados del embarazo.

Brian W. Whitcomb ^a , Renee Turzanski-Fortner ^a , Kevin S. Richter ^b , Simon Kipersztok ^b , Robert J. Stillman ^b , Michael J. Levy ^b and Eric D. Levens ^c .

^a Division of Biostatistics and Epidemiology, University of Massachusetts, School of Public Health and Health Sciences, Amherst, Massachusetts.

^b Shady Grove Reproductive Science Center, Rockville, Maryland.

^c Program in Reproductive and Adult Endocrinology, Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development, Bethesda, Maryland

INTRODUCCIÓN

Se sabe que el efecto de la edad de las mujeres a la hora de conseguir embarazo es muy importante pero, sin embargo, el efecto de la edad de los varones es menos conocido.

El aumento de la edad materna se ha vinculado con una disminución en el número de ovocitos recuperados tras un tratamiento de estimulación ovárica y una disminución de su calidad. En cuanto a la edad paterna, no se sabe muy bien el efecto que puede tener sobre el embarazo, pero sí se ha observado que está relacionada con una disminución en el volumen de eyaculado, menor movilidad espermática y mayor número de espermatozoides con morfología anormal.

En el caso de que la edad materna sea el factor de esterilidad, la donación de óvulos puede ser la solución a dicho problema. Sin embargo, a pesar de que la calidad ovocitaria sea mejor, existe una relación adversa entre la edad de la mujer y el embarazo, ya que el envejecimiento ovárico y uterino pueden afectar al entorno del embrión y afectar, por tanto, al embarazo.

Además, la edad materna y la paterna están relacionadas por lo que los aportes de ambos gametos son difíciles de separar. Entre los pocos estudios previos que han evaluado, la edad paterna utilizando el modelo de donación de óvulos, los resultados son contradictorios. Para este estudio, se ha tratado de estudiar las aportaciones independientes de cada miembro de la pareja en los resultados o tasas de embarazo en ciclos de donación de óvulos.

MATERIAL Y MÉTODOS

Población de estudio

En este estudio se incluyen donantes de ovocitos con edades entre 21-33 años y un índice de masa corporal de 28 Kg/m2. A éstas, se les realizó una historia médica completa en la que se incluían enfermedades infecciosas trasmisibles y enfermedades genéticas para la detección de las cuales, se realizó una historia de tres generaciones. Se les realizó, también, una evaluación psicológica y ginecológica. A todas ellas se les hizo, además, un análisis en el que se analizó la fibrosis quística y una evaluación endocrina en el tercer día del ciclo en la que se analizaron los niveles de E2, FSH, LH y TSH.

Las receptoras de ovocitos se sometieron a un protocolo de sustitución hormonal utilizando una combinación de estrógenos y progesterona. Para ello, se aplican dosis crecientes de estrógenos durante 2 semanas. La transferencia embrionaria se realizó cuando el endometrio tenía un grosor de 8 mm. A las receptoras mayores de 40 años, se les realizó una mamografía y para las mayores de 45 años un electrocardiograma y una analítica de sangre para determinar el nivel de glucosa basal.

Se realizó ICSI en aquellos casos en los que la concentración total era menor a 10 Millones/ml y/o con menos del 4% de formas normales.

Evaluación de los resultados

Las variables analizadas fueron: la tasa de implantación, el embarazo clínico y la tasa de aborto clínico y espontáneo.

Para determinar el embarazo clínico, se observaron los niveles de HCG en suero y se realizó una ecografía de gestación a las 6-7 semanas para determinar la presencia de saco gestacional. La tasa de implantación se determinó relacionando el número de sacos gestacionales y el número de embriones transferidos.

RESULTADOS

Se analizaron un total de 1083 primeros ciclos en los que se analizaron varios parámetros. Entre ellos se observó que el aumento de la edad paterna se asociaba con una disminución significativa en la motilidad del semen y el volumen; sin embargo, no había ninguna asociación significativa entre la edad paterna y la concentración espermática.

No se observó relación entre la edad paterna con el número de ovocitos recuperados, tasa de fertilización, tasa de congelación embrionaria y tasa de embarazo y niño sano en casa. El aumento de la edad paterna se relacionó con el número de embriones transferidos y con la utilización de ICSI como técnica, probablemente debido a la disminución de la movilidad espermática.

Se estudió, además, si los parámetros evaluados variaban dependiendo del número de ciclos realizados. Se observó así que las características del semen no varían significativamente según el número de ciclos. Sin embargo, el número de embriones transferidos (P <0,05)>

El porcentaje de nacidos vivos disminuyó a medida que se realizaban mas ciclo desde el 58,5% de los tratamientos de primer ciclo hasta el 42,9% en el tercer ciclo. El riesgo de aborto espontáneo fue menor en el primer ciclo (8,7%) y más alto cuando se realizaba un tercer ciclo (10,2%).

El éxito global de las técnicas en relación a la edad de las mujeres osciló entre el 66% para las mujeres menores de 35 años y el 57% para las mujeres de más de 45 años. Para los hombres menores de 35 años, el éxito se redujo de 66%, para los que se asociaron con las mujeres menores de 35 años, al 45% para los hombres mayores de 45 años asociados con mujeres mayores de 45 años.

DISCUSIÓN

Según los datos del estudio, el aumento de la edad masculina se asocia con la infertilidad, así como con una disminución de la motilidad del semen y el volumen. Usando el modelo de donación de óvulos, algunos investigadores sugieren que el aumento de la edad paterna está asociado a un empeoramiento de los resultados mientras que otros sugieren que no hay asociación.

En este estudio, se han ajustado la edad de la pareja femenina a la edad del varón, observando que existe una disminución del volumen del semen y de la motilidad con el aumento de edad. Los datos muestran que existe una evidencia limitada entre la asociación de la edad paterna y el número de niños nacidos vivos. Esto sugieren que los efectos de la edad masculina pueden haber sido afectados por el número de ciclos de tratamiento y/o edad por la edad de la pareja receptora.

Por tanto, si existe algún tipo de influencia de la edad del varón en las técnicas de reproducción asistida, ésta parece ser escasa. Además, es importante destacar la importancia de la correlación entre la edad de la mujer y el hombre a la hora de evaluar la tasa de éxito de las técnicas.

Fuente: Fertility and Sterility, vol. 95, pp. 147-151, 2011

FSH y aneuploidías

Domingo, 6 de febrero de 2011, Teresa Rubio Asensio

Altas dosis de hormona FSH aumentan las aneuploidías en ovocitos humanos madurados in vitro.

El objetivo del análisis es estudiar el efecto de la FSH sobre el riesgo de aneuploidías en ovocitos humanos madurados in vitro (IVM). Se analizan pacientes sometidos a ICSI (microinyección intracitoplasmática de espermatozoides) por un factor masculino. Se hicieron 5 grupos de ovocitos inmaduros para IVM según la concentración de FSH (0, 5.5, 22, 100 y 2,000 ng/mL).

Fueron examinados los cromosomas 13, 16, 18, 21 y 22 por hibridación in situ fluorescente (FISH) de los ovocitos seleccionados. Se evaluó la tasa de aneuploidías, la tasa de visualización y la morfología del huso meiótico. Las tasas de aneuploidías fueron 26,7%, 23,3%, 36,75%, 46,67% y 63,3% en los cinco grupos de FSH, respectivamente. Hubo una tasa de aneuploidía significativamente mayor en los ovocitos madurados con 2,000 ng/ml. No hubo diferencias en la morfología del huso entre los grupos de 2,000 y 5.5 ng/ml de FSH.

En conclusión, la alta concentración de FSH en el medio de maduración in vitro aumentó significativamente el error de la primera división meiótica, obteniendo más ovocitos aneuploídes.

Yan-Wen Xu, M.D., Ph.D., Yue-Ting Peng, M.D., Bin Wang, M.D., Yan-Hong Zeng, B.Sc.,Guang-Lun Zhuang, M.D., and Can-Quan Zhou, M.D.

Reproductive Medical Center, the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou, People’s Republic of China

Las aneuploidías son las anomalías cromosómicas más comunes, su frecuencia de aparición aumenta con la edad materna. Se cree que los altos niveles de gonadotropinas, tanto endógenos como exógenos, pueden ser una de las causas de aparición.

En la maduración in vitro (IVM) se añade rutinariamente FSH al medio de cultivo. Existen evidencias que demuestran que esa FSH puede afectar a los cromosomas y dañar la calidad de los embriones. La tasa de aneuploidías en ovocitos humanos oscila entre 23% – 56%.

Estudiaremos si la FSH incrementa la tasa de aneuploidías y si esta tasa es dosis-dependiente, para ello se estudiará la morfología y la configuración cromosómica del huso meiótico.

MATERIAL Y MÉTODOS

Se realizaron 86 microinyecciones de las cuales se recogieron 252 ovocitos inmaduros. Todas las pacientes se sometieron a protocolos largos de estimulación con gonadotropinas. Se excluyeron aquellas pacientes con más 40 años, con más de 3 ciclos fallidos y con menos de 2 ovocitos inmaduros.

Después de observar el complejo cúmulo-ovocito bajo el microscopio y seleccionar los ovocitos inmaduros, éstos se cultivaron en medio para su maduración añadiendo diferentes dosis de FSH (Gonal-F). Se establecieron 5 grupos según dosis: 0, 5.5, 22, 100, 2,000 ng/mL.

Una vez maduros los ovocitos se biopsiaron los cuerpos polares (PBs) e inmediatamente después se visualizó el huso meiótico bajo un microscopio polarizado. Se analizaron 5 cromosomas por FISH (Hibridación in situ fluorescente).

En los ovocitos madurados con 5.5 y 2,000 ng/mL de FSH se tiñó la cromatina y la tubulina. Se evaluó la configuración normal y anormal del huso meiótico con un microscopio de barrido confocal por láser, sin obtener diferencias en entre los 2 grupos.

RESULTADOS

Se maduraron un total de 171 ovocitos, de 172 vesículas germinales y 80 metafase I. No hubo diferencias significativas en aneuploidías entre ovocitos VG y MI (34,5% vs 42,4%), sin embargo sí se observo un incremento de aneuploidías, dosis-dependiente, con el aumento de la concentración de FSH, de 26,7% en el grupo con 0 de FSH a un 63,3% en el grupo con 2,000ng/mL. (23,3% para 5.5ng/mL, 36,7% para 22ng/mL y 46,7% para 100ng/mL).

La tasa global de visualización del huso fue 52,0% (89/171) de los ovocitos visualizados se obtuvo resultado de FISH en 78. La tasa de visualización en ovocitos aneuploides fue 53,8% (29/59) y en ovocitos normales fue 49,2% (49/91).

DISCUSIÓN

En modelos animales existen evidencias que apoyan la hipótesis de que los niveles altos de FSH es una de las causas de aneuploidías. En ratones, se ha visto que la FSH induce anomalías cromosómicas en IVM de manera dosis-dependiente.

Los resultados del estudio muestran un aumento de aneuploidías con la concentración de FSH elevada, sobre todo en el grupo de mayor concentración (2,000ng/mL-63,3%).

Todavía no se ha podido establecer exactamente cómo la FSH induce esas aneuploidías. Puede ser debido a que el ovocito es muy susceptible en la primera meiosis y el ambiente en el que está ejerce mucha influencia sobre él. También puede ser debido al efecto de la FSH sobre los microtúbulos.

Roberts muestra en su estudio que la FSH no afecta robustamente a la morfología del huso, pero sí se observa que los cromosomas están más dispersos y desalineados en ovocitos cultivados con 2,000ng/mL.

Hay que hacer atención en el uso de gonadotropinas en las técnicas de reproducción, ya que las altas concentraciones de FSH juegan un papel muy importante en la tasa de aneuploidías de los ovocitos madurados in vitro.

Fuente: Fertility and Sterility, vol. 95, nº. 1, pp. 99-104, 2011

Anomalías citogenéticas y reproducción asistida

Riesgo de anomalías citogenéticas al final del primer trimestre en embarazos conseguidos mediante reproducción asistida.

El objetivo de este estudio es determinar si los embarazos conseguidos mediante reproducción asistida tienen un mayor riesgo de presentar anomalías citogenéticas al final del primer trimestre en comparación con los embarazos concebidos espontáneamente.

Se realizó el diagnóstico citogenético mediante muestras de vellosidades coriónicas (CVS) de 1.606 embarazos espontáneos y 559 embarazos de reproducción asistida.

No se encontraron diferencias en cuanto a anomalías citogenéticas en embarazos concebidos espontáneamente y concebidos mediante TRA (7% vs 5,4%), ni tampoco en cuanto a la invasividad del tratamiento, 4,7% en el grupo in vivo vs 5,8% en el grupo de in vitro.

Así pues los tratamientos de fertilidad no incrementan el riesgo de anomalías citogenéticas en el feto.

Deirdre A. Conway, M.D., ^a,b Satin S. Patel, M.D., ^a Jennifer Liem, D.O., ^a Kenneth J. Fan, B.S., ^a Ray Jalian, B.S., ^a, John Williams, III, M.D., ^a,b and Margareta D. Pisarska, M.D.

^a Department of Obstetrics and Gynecology, Cedars-Sinai Medical Center and
^b Department of Obstetrics and Gynecology, David Geffen School of Medicine, University of California, Los Angeles, California

Según datos del CDC (Centers for Disease Control) en EE.UU, el 12% de la población en edad fértil tiene problemas de fertilidad. Como resultado ha habido un incremento del uso de las técnicas de reproducción asistida (TRA), en 2007 nacieron sólo en América 57.564 niños (>1%) gracias a estas técnicas que incluyen estimulación ovárica con citrato de clomifeno o gonadotropinas, inseminación artificial y fertilización in vitro.

Los tratamientos de fertilidad se han asociado a diferentes complicaciones en el embarazo como preeclampsia, placenta previa, desprendimiento de placenta, crecimiento intrauterino restringido y se han asociado también con defectos congénitos y anormalidades cromosómicas. Su explicación podría implicar errores epigenéticos o incluso problemas genéticos resultantes del tratamiento de la infertilidad.

Los estudios realizados sobre el tema son contradictorios, algunos encuentran asociación entre las anomalías genéticas y los tratamientos de reproducción y otros no la encuentran.

Otro factor importante a determinar es si las anomalías citogenéticas que puede presentar un niño se deben al tratamiento de reproducción o bien a la propia pareja estéril.

Se intentará determinar el riesgo de anomalías citogenéticas en embarazo espontáneo y por TRA mediante el diagnóstico de las vellosidades coriónicas (CVS) y además, se comparará el riesgo de anomalías en embarazos según la técnica utilizada. Hiperestimulación ovárica controlada con o sin inseminación artificial, “grupo fertilización in vivo” y mediante fertilización in vitro (FIV), “grupo in vitro”.

MATERIAL Y MÉTODOS

Estudio retrospectivo donde se evalúan todas las mujeres que acuden a nuestro centro con embarazo único desde 2000 a 2004, se realiza CVS por un experimentado perinatólogo entre la semana 9 y la 12 de gestación. Las muestras se obtuvieron mediante vía transvaginal o transabdominal dependiendo del caso y después se realizó el análisis citogenético.

Se clasificaron las anomalías cromosómicas según el tipo de defecto: trisomías autosómicas, mosaicos autosómicos, inversiones, trisomías gonosómicas, mosaicos gonosómicos, translocaciones y monosomías.

Se hicieron 2 grupos, uno de embarazos concebidos espontáneamente (n=1.606) y otro con embarazos concebidos mediante tratamiento (n=555), éste se dividió a su vez en dos. Grupo “fertilización in vivo” (n=233), pacientes con estimulación ovárica controlada con o sin inseminación artificial y grupo de “fertilización in vitro” (n=326), pacientes de FIV con o sin ICSI.

Se calculó para cada grupo la edad materna y el porcentaje de anomalías fetales citogenéticas.

RESULTADOS

Se comparó la edad gestacional de los 2 grupos, siendo la edad materna 39,0 para el grupo de concepción espontánea y 39,4 para el de concepción por tratamiento, esta diferencia, aunque es pequeña, es estadísticamente significativa (P=0.01). No hubo diferencias entre los grupos “in vivo” e “in vitro” (39,4 y 39,5).

Cuando se comparó la incidencia de anomalías citogenéticas entre los 2 grupos, el grupo de concepción espontánea tuvo una incidencia del 7% (112/1.606) y el grupo de concepción por tratamiento un 5,4% (30/559). Entre los grupos in vivo e in vitro la incidencia fue 4,7% (11/233) y 5,8% (19/326), respectivamente. No hubo significación estadística.

Tampoco se encontraron diferencias respecto al tipo de anomalía citogenética entre los grupos. El tipo más común encontrado fueron las trisomías autosómicas (50-60%), seguido de los mosaicismos autonómicos. Se encontraron pocas inversiones, translocaciones, monosomías, trisomías y mosaicos gonosómicos.

DISCUSIÓN

Al comparar ambos grupos, concepción espontánea y tratamiento de fertilidad, no se encontraron diferencias en el índice de anomalías citogenéticas, tampoco se encontraron al comparar los grupos in vivo e in vitro. Respecto al tipo de anomalía citogenética no hubo diferencias entre los diferentes grupos.

Los resultados muestran que los tratamientos de fertilidad no incrementan el riesgo de anomalías citogenéticas en el feto al final del primer trimestre, ni la predisposición a tener ningún tipo específico de anomalía.

Aunque se ha demostrado que las TRA son seguras respecto a la incidencia de defectos en el nacimiento, algunos estudios sugieren que las aneuploidías embrionarias tempranas y los mosaicismos pueden estar relacionados con la estimulación ovárica en la FIV. Sin embargo, estos estudios fueron subóptimos por las limitaciones metodológicas del análisis genético.

Hansen realizó un estudio con muestras de vellosidades coriónicas en embarazos espontáneos y en embarazos por TRA, donde encontraron un mayor riesgo de anomalías cromosómicas en las parejas que concibieron por TRA. Esto se puede explicar a que la edad materna del grupo que se sometió a TRA era significativamente mayor a la del grupo que concibió espontáneamente.

Nuestras conclusiones han sido corroboradas por un gran estudio multicéntrico prospectivo de Shevell que no ha encontrado una mayor incidencia de anomalías cromosómicas en fetos de mujeres que se someten a TRA.

Los resultados muestran que la manipulación in vitro, en comparación con la manipulación in vivo, tampoco supone un mayor riesgo de anomalías citogenéticas. Las limitaciones de tamaño de la Shevell nos impiden comparar la incidencia de anomalías citogenéticas entre los embarazos concebidos mediante FIV convencional y FIV con ICSI.

Aunque se ha mostrado que las parejas que conciben a través de TRA poseen el mismo riesgo de tener un embarazo citogenéticamente anormal, los médicos deben seguir ofreciendo la detección de aneuploidías y las pruebas diagnósticas no invasivas a todas las parejas, independientemente del modo de la concepción.

Fuente: Fertility and Sterility, vol. 95, nº. 2, pp. 503-506, 2011

ADN del semen y calidad del ovocito

Domingo, 13 de marzo de 2011, Mireia Poveda García

Los efectos de la fragmentación del ADN del semen dependen de la calidad del ovocito.

En este estudio se ha analizado el efecto de la fragmentación de ADN espermático en los resultados reproductivos. Para ello, se han analizado 210 sémenes cuyas parejas se someten a ciclos de FIV-ICSI, tanto utilizando semen en fresco o congelado y ovocitos propios o de donante.

Con ello, se ha observado que la tasa de fragmentación del ADN no se ve alterada con la congelación del semen de forma significativa y que estos niveles no muestran diferencia después de realizar el swim-up. Con la utilización de ovocitos propios, se vio que si los niveles de fragmentación aumentaban, se observaba una disminución de la probabilidad de embarazo. En el caso de los ovocitos de donante, esta disminución fue menor pero no significativa.

Esto demuestra que el efecto de la fragmentación del ADN espermático no depende ni del origen del semen, ni del proceso de fertilización utilizado y que sus efectos pueden ser disminuidos por la capacidad reparadora de los ovocitos.

Marcos Meseguer ^a, Rebeca Santiso ^b, Nicolas Garrido ^a, Sandra García-Herrero ^a, Jose Remohí ^a, Jose Luis Fernandez ^{b, c}

^a IVI, Universidad de Valencia, Valencia
^b Sección de Genética y Unidad de Investigación, Hospital ‘‘Teresa Herrera,’’ Complejo Hospitalario Universitario A Coruña.
^c Centro Oncológico de Galicia.

INTRODUCCIÓN

Se ha visto que la fragmentación del ADN espermático es un marcador de la calidad del semen y puede predecir el éxito de la fertilización ya que la integridad del ADN del gameto masculino es esencial para que se obtenga un embarazo exitoso.

La fragmentación del ADN del espermatozoide se produce como consecuencia de roturas no reparadas producidas durante el proceso de remodelación de la cromatina; también se ha visto que el estrés oxidativo puede inducir a elevar la fragmentación del ADN. Además, después de la eyaculación, la fragmentación del ADN va cambiando y se puede alterar por el manejo y procesamiento de la muestra.

Se sabe que el daño en el ADN espermático puede afectar a la fertilidad masculina disminuyendo la tasa de fertilización y es por ello, por lo que la determinación del nivel de fragmentación del ADN de los espermatozoides puede ser de mucho interés sobre todo en parejas con bajas tasas de fertilización, implantación o mala calidad embrionaria. Es por este motivo, por lo que se ha observado que la tasa de embarazo disminuye cuando el porcentaje de espermatozoides fragmentados es superior al 30%.

Sin embargo, para que la calidad embrionaria sea la adecuada y se consigan altas tasas de implantación es necesario, además de la integridad en el material genético del espermatozoide, la calidad ovocitaria. Por eso, la donación de ovocitos es una herramienta útil para poder estudiar la calidad del semen ya que reduce o minimiza los efectos de la infertilidad femenina, pudiendo así evaluar el efecto de la fragmentación del ADN en el proceso reproductivo. En este sentido, la ausencia de relación entre los niveles de fragmentación del ADN espermático y la tasa de embarazo puede ser explicado por la capacidad del ovocito a reparar los daños en la integridad del ADN del espermatozoide.

En este estudio, se ha cuantificado el efecto de la fragmentación del ADN espermático de muestras utilizadas para FIV-ICSI, tanto congeladas o utilizadas en fresco, en ciclos propios y en ciclos de donación de ovocitos.

MATERIAL Y MÉTODOS

En este estudio se ha evaluado un total de 210 parejas sometidas a FIV-ICSI. Los criterios de inclusión para el estudio fueron: pareja femenina con edades comprendidas entre los 30 a los 45 años, sometidas a un primer ciclo de FIV y con un Índice de Masa Corporal inferior a 30Kg/m2. La transferencia embrionaria de los ciclos estudiados se realizó siempre a las 72 horas tras la recuperación ovocitaria. Del estudio se excluyeron a aquellas mujeres con algún tipo de patología uterina, disfunciones endocrinas, abortos recurrentes y oligospermias severas.

Para evaluar el nivel de fragmentación del ADN espermático se utilizó el Kit comercial Halosperm. A las muestras de semen, tanto las utilizadas en fresco como las congeladas, se les realizaron el test de fragmentación antes y después de ser capacitadas mediante swim-up.

Se analizaron un total de 182 ciclos de ICSI y 28 ciclos en los que se realizó FIV. De ellos, en 112 se utilizaron ovocitos de donante y en 98 ovocitos de la propia paciente. En todos ellos, el embarazo clínico fue confirmado por presencia de saco gestacional con latido a las 7 semanas de embarazo. Se consideró aborto involuntario cuando el embarazo no llegó a la semana 22.

RESULTADOS

La edad media de los hombres incluidos en el estudio fue de 37,78 años y de las mujeres de 37,85. Los factores de infertilidad más frecuentes fueron en un 36,2% de los casos por mala calidad ovocitaria, edad materna avanzada en un 33,1%, insuficiencia ovárica prematura en un 10,6%, obstrucción tubárica en un 5%, baja respuesta ovárica en un 4,4% de los casos y factor masculino severo en un 3,1%.

En cuanto a los niveles de fragmentación del ADN espermático, se observó que la capacitación del semen por el método de swim-up reducía los niveles de espermatozoides con ADN fragmentado en el eyaculado. Esta mejora fue más significativa en las muestras de semen utilizadas en fresco que en las muestras congeladas y descongeladas. Por todo esto, se evaluó el efecto de la fragmentación del ADN espermático sobre los resultados reproductivos obtenidos si se utilizaban ovocitos propios o de donante.

Resultados con ovocitos propios.

En estos ciclos se observó que, en primer lugar, la tasa de embarazo no variaba si el semen utilizado era fresco o congelado. Tampoco existía variación significativa en los niveles de fragmentación antes y después del swim-up. Las tasas de embarazo no se vieron afectadas si se realizaba FIV o ICSI. Además, se observó que el proceso de fertilización, bien FIV o ICSI, no modificó los niveles de fragmentación

Con los resultados obtenidos, se relacionó los efectos de la fragmentación antes y después de la capacitación. En este caso, no se tuvo en cuenta ni si el semen era congelado ni si se había realizado FIV o ICSI. Con ello, se observó que por cada 10% de incremento de los niveles de fragmentación del ADN espermático, la probabilidad de no quedar embarazada aumentaba.

Resultados con ovocitos de donante

Al igual que con los ovocitos propios, en el caso de la tasa de embarazo no se veía variación significativa si se utilizaba semen en fresco o congelado. No se observó tampoco variación en el nivel de fragmentación de ADN espermático, antes y después del Swim-up. Ni una variación significativa en las tasas de embarazo tras realizar FIV o ICSI y los niveles de fragmentación no variaron tras realizar una u otra técnica.

Con los resultados obtenidos no se pudo determinar que en el caso de óvulos de donante, los niveles de fragmentación de ADN afectaran a la probabilidad de embarazo.

DISCUSIÓN

Los conocimientos en el campo de la mutagénesis han demostrado que, cuando el daño en el ADN es extenso, algunas lesiones son imposibles de reparar. La tasa de embarazo disminuye considerablemente cuando el ADN espermático está muy dañado ya que el ovocito es incapaz de reparar este daño. Además, se ha visto que la capacidad de reparación del ADN espermático está en función de la calidad del ovocito y por tanto, depende de la edad de la paciente, el entorno ovárico y del nivel de fecundidad.

En este estudio se ha analizado si el hecho de utilizar ovocitos de donante mejoraba la tasa de embarazo, en el caso de que los niveles de fragmentación del ADN fueran elevados, frente a utilizar ovocitos propios. Con ello se ha observado que el efecto de la fragmentación de ADN no depende del procedimiento utilizado para la fertilización y que estos niveles no afectan de manera significativa a la capacidad de fertilización del semen.

Además, muestra que el proceso de congelación-descongelación no afecta directamente a la integridad del ADN pero aumenta la susceptibilidad del ADN que puede ser dañado durante el proceso de preparación del semen para ser utilizado en las técnicas de reproducción asistida.

Por otra parte, se ve que la calidad de los ovocitos condiciona los niveles de fragmentación ya que no se detectó ningún problema en el caso de mujeres en edad fértil con ovocitos de buena calidad y es por ello, por lo que, a pesar de que la fragmentación del ADN influye negativamente en las tasa de embarazo, este problema también depende de la capacidad del ovocito de reparar este daño.

Por tanto, el efecto de la fragmentación del ADN espermático sobre la fertilidad tiene un efecto mixto ya que la capacidad de estos espermatozoides de producir embriones de adecuada calidad depende en gran medida de la capacidad reparadora del ovocito.

Fuente: Fertility and Sterility, vol. 95, nº 1, pp. 124-128, 2011

Progesterona en fase lútea

Domingo, 6 de marzo de 2011, Teresa Rubio Asensio

Progesterona en la fase lútea incrementa la tasa de recién nacido después de transferencias de embriones congelados.

Estudio prospectivo randomizado realizado a 435 mujeres, cuyo objetivo es ver si el suplemento con progesterona tiene un efecto beneficioso en la tasa de recién nacido después de las transferencias de embriones congelados en ciclos naturales.

Las pacientes en estudio se administraron progesterona vaginal 400 mg dos veces al día desde el día de la transferencia, las pacientes control no tomaron progesterona. Se evaluó la tasa de recién nacido vivo, la tasa de embarazo bioquímico y embarazo clínico y la tasa de aborto espontáneo.

Los resultados mostraron que la tasa de recién nacido vivo es significativamente mayor en el grupo que se puso progesterona vaginal como soporte de la fase lútea comparado con las que no recibieron progesterona. Las demás tasas evaluadas no mostraron diferencias.

Kerstin Bjuresten, B.S.,^a Britt-Marie Landgren, M.D., Ph.D., ^a Outi Hovatta, M.D., Ph.D., ^a and Anneli Stavreus-Evers, Ph.D. ^b

^a Department of Clinical Science, Intervention and Technology, Karolinska Institutet, Stockholm;
^b Department of Women’s and Children’s Health, Uppsala University, Uppsala, Sweden

Las trasferencias de un sólo embrión se han convertido en uno de los procedimientos estándar con el objetivo de evitar los embarazos múltiples en fecundación in vitro. Datos recientes muestran que transferir un único embrión y criopreservar el resto, mejora la tasa acumulativa de recién nacido y disminuye la tasa de embarazo múltiple.

La transferencia de embriones congelados en ciclo natural es la elección preferida para mujeres con ciclos ovulatorios normales, ya que los protocolos de estimulación ovárica comprometen la receptividad del endometrio.

La progesterona es fundamental para el desarrollo del endometrio y la implantación del embrión, bajos niveles circulantes de esta hormona pueden provocar abortos. En mujeres con fertilidad probada, la producción de progesterona es suficiente como soporte del endometrio y para facilitar la implantación. En mujeres estériles donde se transfieren los embriones en su ciclo natural es recomendable suplementar el ciclo con progesterona.

Varios autores como Orvieto han mostrado los beneficios de suplementar el endometrio con progesterona después de realizar una criotransferencia en ciclos artificiales.

MATERIAL Y MÉTODOS

Un total de 435 mujeres participaron en este estudio prospectivo, aleatorio y controlado. Se incluyeron mujeres con esterilidad de origen desconocido, esterilidad por factor tubárico y esterilidad por factor masculino.

Se hicieron 2 grupos, el grupo de estudio que tomó progesterona vaginal micronizada, 400 mg dos veces al día desde la noche de la transferencia (n=219) y el grupo control que no recibió ningún tipo de suplemento hormonal (n=216).

Se realizó una ecografía vaginal a todas las mujeres entre el día 10 y el 14 del ciclo. Se realizan medidas del folículo dominante y cuando éste ha alcanzado un diámetro de 16mm, la mujer comienza a realizarse pruebas de orina para detectar el pico de LH. Se utilizan las pruebas de ovulación digital de Clearblue (Suiza). Tres días después del pico de LH, se descongelan los embriones para realizar la transferencia.

Se transfirieron sólo embriones de grado A (todas las blastómeras intactas) o grado B (entre 50-100% de blastómeras intactas), aquellos embriones de mala calidad no fueron transferidos.

La medida realizada para confirmar embarazo fue la medición de la concentración de hormona gonadotropina coriónica humana (hCG) en suero. Se evaluó la tasa de aborto temprano, tasa de embarazo clínico, tasa de aborto espontáneo y tasa de recién nacido vivo.

RESULTADOS

De las 435 mujeres que participaron, se excluyeron 42 mujeres, 34 que no querían participar y el resto por diferentes motivos como disfunción ovárica, donación de ovocitos, cáncer, etc. La edad media del grupo de estudio con progesterona fue de 35 años y del grupo control fue 34 años.

La tasa de recién nacido fue significativamente mayor en el grupo de estudio que en el grupo control, 30% frente al 20%. En el resto de tasas, aborto temprano, embarazo clínico y aborto espontáneo no hubo diferencias significativas.

DISCUSIÓN

Este estudio muestra que la tasa de recién nacido en mujeres que suplementan con progesterona su ciclo natural es mayor que en mujeres que no toman ningún suplemento hormonal. La progesterona es esencial, no sólo para el desarrollo del endometrio, también posiblemente para del desarrollo del embrión a través de la regulación del sistema inmune.

Para el éxito de la implantación embrionaria, el endometrio debe ser de buena calidad. Se sabe que la estimulación ovárica altera la expresión de genes en el endometrio pero no se conoce si hay diferencia en la expresión de genes en los ciclos naturales comparado con los ciclos artificiales.

El aumento de progesterona durante la fase lútea, en lugar de un nivel específico, determina la receptividad del endometrio.

La administración de progesterona se realizó mediante vía vaginal, ya que de forma oral es rápidamente metabolizada. Vaginalmente, la progesterona aumenta su concentración en suero a un pico máximo después de 8 horas tras su administración, después cae gradualmente durante las siguientes 8 horas, por eso se administra 2 veces al día.

En otros estudios ya se había demostrado que la tasa de implantación es mayor en los ciclos naturales que en los artificiales pero no se habían demostrado las diferencias en la tasa de recién nacido vivo.

Las mujeres del estudio presentaron una función ovulatoria normal, demostrada mediante exploraciones ecográficas.

El numero de embriones de grado A y B transferidos fue similar en los dos grupos, igual que la técnica realizada (FIV O ICSI).

Se puede concluir con el estudio que la influencia de la progesterona en el endometrio y en el proceso de implantación puede explicar la tasa aumentada de recién nacidos.

El suplemento de progesterona como apoyo de la fase lútea en mujeres sometidas a transferencias de embriones congelados en los ciclos naturales es beneficioso.

Fuente: Fertility and Sterility, vol. 95, nº 2, pp.534-537, 2011